發(fā)布時(shí)間： 2023-03-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 1473次
分子生物試劑中的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑是根據(jù)目前常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20，60，80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于1mM。
此外，蛋白質(zhì)還可用雙縮脲試劑來(lái)檢測(cè)。雙縮脲試劑是一個(gè)用于鑒定蛋白質(zhì)的分子生物試劑。它是一個(gè)堿性的含銅試液，呈藍(lán)色，由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制，遇到蛋白質(zhì)顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí)(多肽)，試液中的銅與多肽配位，絡(luò)合物呈紫色。可通過(guò)比色法分析濃度，在紫外可見(jiàn)光譜中的波長(zhǎng)為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境，因此它可被其他堿，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，會(huì)延長(zhǎng)試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護(hù)反應(yīng)生成的絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?，從而使試劑失效?/div>
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